Забір матеріалу для лабораторних досліджень (дослідження крові, сечі, мокротиння, калу)
До об'єктивних методів дослідження належать лабораторні методи дослідження, дослідження функціонального стану методом проб, рентгеноелектрофізіологічні, ультразвукове обстеження та інші.
До додаткових методів належать методи лабораторної діагностики, інструментальні, рентгенологічні та ін. Вони дозволяють визначити суть патологічного процесу. Так, якщо при проведенні ендоскопії шлунка виявляється пухлинне ураження, виробляють біопсію та цитологічне дослідження одержаного матеріалу, визначаючи стадію захворювання. Результати цих досліджень дозволяють вибрати тактику подальших дій лікаря: оперативне втручання, хіміотерапія, променева терапія. При цьому враховується загальний стан хворого, а також зміни з боку інших органів та систем, дані лабораторного дослідження.
У виконанні процедур із забору біологічного матеріалу велика, якщо не провідна роль належить медсестрі. Саме медсестра збирає мокротиння, кров, кал, сечу тощо. і саме від неї залежить правильність збору та відповідно результат аналізу.
Лабораторні методи дослідження знаходять дедалі більшого значення у клінічній практиці. За останнє десятиліття в лабораторну практику введено близько 190 нових методів, що дозволяють проводити лабораторні дослідження у таких напрямках:
- загальноклінічні дослідження (сечі, калу, шлункового та дуоденального вмісту, ліквору, ексудатів, транссудатів та інших біологічних рідин);
- гематологічні дослідження (крові, кісткового мозку та ін);
- Біохімічні дослідження (у всіх біологічних рідинах);
- мікробіологічнідослідження, що включають бактеріологічні, вірусологічні та паразитологічні методи дослідження;
- імунологічні методи (у тому числі серологічна діагностика);
- Вивчення системи гемостази.
Ці методи все частіше проводяться з використанням у практичній лабораторній діяльності сучасного обладнання, автоматичних та напівавтоматичних аналізаторів, діагностичних уніфікованих тест-систем, комп'ютерної обробки отриманих результатів, що дозволяє зменшити можливість діагностичних помилок.
З'являються і нові напрямки, що активно входять у практичну клінічну лабораторну діагностику, такі як молекулярна біологія, що складається з молекулярно-генетичних та інших методів дослідження, що поєднують гістологічні та цитологічні варіанти молекулярно-біологічних методів. Всі ці методи здійсненні із застосуванням дорогого лабораторного обладнання та діагностичних тест-систем. Незважаючи на збільшення точності діагностики з їх застосуванням, велике і, як правило, вирішальне значення залишається за технікою отримання матеріалу, що досліджується.
Тому, як правильно отримано, доставлений матеріал для подальшого лабораторного дослідження, багато в чому залежить якість та інформативність діагностики. та імунологічних методів дослідження. Це дозволяє підходити до досліджуваного процесу з різних позицій та давати більш точну інформацію про сутність патологічного явища.
Загальна структура досліджень крові: методи досліджень –гематологічні, біохімічні, імунологічні,мікробіологічні (бактеріологічні, вірусологічні, паразитологічні), системи гемостазу.
Об'єкти досліджень: венозна кров, цільна кров, сироватка, плазма, гепаринізована, цитратна, оксалатна кров, капілярна кров (цілісна, гепаринізована, цитратна та оксалатна).
Клінічне дослідження крові.
До гематологічних методів дослідження належать: визначення гемоглобіну крові; визначення вільного гемоглобіну плазми; визначення фракцій гемоглобіну; підрахунок еритроцитів у крові; визначення гематокритної величини (показника); визначення осмотичної резистентності еритроцитів; підрахунок ретикулоцитів; підрахунок тромбоцитів; визначення швидкості осідання еритроцитів (ШОЕ); підрахунок лейкоцитів; підрахунок лейкоцитарної формули із описом морфології формених елементів крові. Взяття крові (для клінічного дослідження крові) – палець пацієнта протирають ватою, змоченою у спирті, а потім тугим стерильним ватним тампоном. Роблять прокол шкіри пальця на глибину 4 мм, ближче до його бічної поверхні. Першу краплю крові, що виступила, видаляють стерильним сухим ватним тампоном, а потім беруть кров для дослідження (вона повинна витікати вільно, без натискання). В останніх краплях крові, що вільно витікає, визначають тромбоцити.
Визначення концентрації гемоглобінугемоглобінціанідним методом: до 5 мл трансформуючого розчину додають 20 мкл крові (розведення в 251 раз), ретельно перемішують і залишають стояти 10 хв. Потім вимірюють оптичну щільність дослідної проби, порівнюючи з холостою пробою на медичному калориметрі при довжині хвилі 500-560 нм (зелений світлофільтр) у кюветі з товщиною шару 1 см. Нормальна концентрація гемоглобіну в крові у жінок 120-140 г/л, у чоловіків -160 г/л. Зміст у кровігемоглобіну нижче критичного (20-30 г/л) може призвести до смерті.Визначення кількості еритроцитів -визначення кількості еритроцитів в 1 л крові: капілярною піпеткою набирають 20 мкл крові, кінчик піпетки обережно витирають, кров продмухують у пробірку, що містить 0,9 % NaCl (хлорид натрію). Піпетку ретельно промивають у верхньому шарі рідини, вміст пробірки перемішують. Підрахунок ведеться у камері Горяєва, після заповнення якої залишають на 1 хв у стані спокою для осідання формених елементів. Підрахунок ведуть при малому збільшенні мікроскопа (об'єктив 8x, окуляр 10х або 15х) при опущеному конденсорі в 5 великих квадратах (розкреслених на 16 малих), що розташовані по діагоналі. Кількість еритроцитів в 1 мкл крові визначають за формулою: де Х - кількість еритроцитів в 1 мкл; А - кількість еритроцитів у 80 малих квадратах; 200 - ступінь розведення крові; 4000 - множник, що веде результат до об'єму 1 мкл крові, тому що об'єм малого квадрата 1/4000 мкл. Практично кількість еритроцитів, підрахована в 80 малих квадратах, множать на 10 000. Перераховуючи еритроцити в одиниці системи СІ-Т (Тера) в 1 л, отриману цифру множать ще на 1 000 000. У нормі кількість еритроцитів у жінок 4,7 х10 ? / л, у чоловіків 4-5,1 х10 ? / л. Зменшення числа еритроцитів притаманно анемії, ступінь її різна залежно від виду.
Визначення кількості лейкоцитів в 1 л крові: капілярною піпеткою набирають 20 мкл крові і вносять в пробірку з 0,5% оцтовою кислотою, піпетку промивають розчином, вміст добре перемішують. Підрахунок ведуть у камері Горяєва, заповнивши яку, залишають на 1 хв у стані спокою для осідання лейкоцитів. Підрахунок ведуть за малого збільшення мікроскопа (об'єктив 8x, окуляр 10x чи 15x) при опущеномуконденсорі у 100 великих квадратах, що відповідає 1600 малим. Кількість лейкоцитів в 1 мкл крові вважають за формулою: де Х - кількість лейкоцитів в 1 мкл; А - кількість лейкоцитів, порахованих у 100 великих квадратах; 1600 - кількість малих квадратів; 20 - розведення крові; 4000 - множник, що приводить результат до об'єму 1 мкл крові, виходячи з об'єму малого квадрата (1/4000 мкл).
Практично кількість лейкоцитів, підрахована у 1600 малих квадратах, множать на 50, а для переведення в одиниці СІ (Гіга в 1 л) отриману цифру множать на 1 000 000. У нормі кількість лейкоцитів коливається: 4–8,8 Г/л.
Визначення швидкості осідання еритроцитів: за допомогою капіляра Панченкова набирають із пальця кров двічі до мітки «К» і вносять щоразу в пробірку з цитратом натрію, змішують, набирають цю суміш до мітки «О» і ставлять у штатив Панченкова на 1 год у строго вертикальному положенні. Швидкість осідання виражають у мм за 1 год. У нормі ШОЕ у жінок становить 2-15 мм/год, для чоловіків 1-10 мм/год.
Визначення колірного показниказдійснюється обчисленням за формулою: ЦП = кількість гемоглобіну (г/л) х 3 ділять на перші дві цифри виявленої кількості еритроцитів в 1 мкл крові.
Приготування мазків крові.На предметне скло наносять невелику краплю крові і шліфованим предметним склом торкаються неї під кутом 45°. Після того як крапля розтікається, між склом роблять мазок праворуч наліво доти, поки крапля повністю не розподілиться. Забарвлення мазків крові здійснюють за Паппенгеймом або Романовським. Забарвлення за Паппенгеймом: сухі нефіксовані мазки поміщають у контейнер і опускають у кювету з розчином барвника-фіксатора Май-Грюнвальда на 5 хв, після чого контейнер з мазками обполіскують у кюветі з дистильованоюводою і дофарбовують барвником Романовського (1-2 краплі на 1 мл води) на 10-15 хв. Потім змивають водою і висушують на повітрі. Забарвлення за Романовським здійснюється так само, як і за Паппенгеймом, але фіксується не реактивом Май-Грюнвальда, а етиловим спиртом (20-30 хв).
Підрахунок лейкограми слід проводити в тонких ділянках мазка, по верхньому і нижньому краю, пересуваючи мазок по лінії меандру, починаючи з самого краю. Результати підрахунку лейкоцитів є відносними, оскільки змінюються залежно від загальної кількості лейкоцитів. Оцінюючи даних лейкограми, крім відсоткового змісту лейкоцитів, слід враховувати їх абсолютні величини. Лейкоцити у дорослого в нормі у % та в одиницях СІ (Г/л) складають: базофільні гранулоцити – 0–1 % – 0–0,065 Г/л; еозинофільні гранулоцити – 0,5–5 % – 0,2–0,3 Г/л; паличкоядерні нейтрофільні гранулоцити - 1-6% - 0,04-0,3 Г/л; сегментоядерні нейтрофільні гранулоцити - 47-72% - 2,0-5,5 Г/л; моноцити - 3-11% - 0,09-0,6 Г / л; лімфоцити - 19-37% - 1,2-3,0 Г/л.
Визначення гематокритної величини. Гематокритна величина встановлює співвідношення між обсягом формених елементів крові та всім обсягом крові. Визначається за допомогою центрифугування гепаринізованої чи цитратної крові у спеціальних капілярах. Як гематокритна трубочка можуть використовуватися піпетки Панченкова, стягнуті гумовим кільцем. Центрифугують 30 хв при 3000 об/хв. У нормі загальний обсяг еритроцитів у чоловіків дорівнює 04-048 л/л, у жінок - 036-042 л/л.