Фіксуючі засоби та їх застосування
Застосовувані фіксатори поділяють на дві основні групи:
1) фіксуючі речовини (прості фіксатори);
2) фіксуючі суміші (складні фіксатори). Існує велика кількість тих та інших. У цьому посібнику наводяться найпоширеніші фіксатори.
Прості фіксатори
Формалін (формол) є найдешевшим і найпоширенішим фіксатором. У чистому вигляді представляє світлу, сильно пахнучу рідину, що складається з 40% водного розчину формальдегіду. Застосовується переважно як 10-20% водного розчину, навіщо 1 частина нерозведеного формаліну розводять 9 чи 4 частинами води. Готують розчин обов'язково на водопровідній воді, оскільки дистильована викликає набухання тканин. Широке застосування формалін отримав завдяки ряду властивостей:
а) високого ступеня дифузії;
б) здатності добре зберігати форму, фарбування та структуру досліджуваного об'єкта;
в) надавати тривалу фіксуючу дію (до кількох років), яка суттєво не погіршувала при цьому якість матеріалу;
г) добре зберігати жири та ліпоїди.
Висока дифузійна здатність і незначна осаджуюча дія дозволяють формаліну досить швидко і глибоко проникати в тканини, що дозволяє фіксувати шматочки органу від 1 см і більше, а при необхідності і досить великі органи цілком.
Термін фіксації тканин у формаліні 24-48 годин. Звичайний формалін, як правило, містить домішок метилового спирту та мурашиної кислоти, кількість якої збільшується під впливом світла.
При охолодженні формаліну в розчині з'являється каламут, що осідає у вигляді білого осаду (параформальдегід). Такий самий осад спостерігається на стінках судини та при випаровуванні формаліну. Тому формалін слід зберігати в темній щільноскляний посуд, що закривається, при температурі не нижче 9°С.
Нейтралізація формаліну. Домішка у формаліні мурашиної кислоти надає розчину слабокислого характеру, що небажано при застосуванні низки методів дослідження (деякі гістохімічні реакції, срібло розчином азотнокислого срібла). Спосіб нейтралізації формаліну досить простий: у посудину засипають вуглекислий кальцій (або вуглекислу магнезію) у такій кількості, щоб на дні утворився шар завтовшки 1,5-2 см. Потім наливають формалін, кілька разів енергійно струшують і залишають стояти 24-48 годин. Протягом цього часу відбувається нейтралізація розчину.
Побічні дії формаліну. Тривале зберігання препаратів у концентрованому розчині формаліну надає тканинам надмірну щільність, що ускладнює подальшу обробку та погіршує якість препарату. Усунення цього недоліку' можливе шляхом приміщення матеріалу на 2 тижні в 1% розчин азотнокислого срібла або 10% розчин лимонної кислоти. Тривале зберігання 10% розчині формаліну призводить також до набухання об'єкта, що необхідно пам'ятати при його вимірюванні після фіксації.
При фіксації формаліном у препаратах нерідко з'являється темно-коричневий кристалічний осад – результат взаємодії формаліну з гемоглобіном, що знаходиться в тканинах. Його видаляють шляхом поміщення незабарвлених зрізів в 1-5% розчин нашатирного спирту або 70° етиловий алкоголь на різні терміни (від 5 хвилин до 4 годин). Потім препарат ретельно промивають та ведуть подальшу обробку.
Слід постійно пам'ятати, що тривала дія парів формаліну сильно дратує слизові оболонки. Змочування шкіри формаліном має дублячий ефект, а при повторних частих контактах викликає суху екзему. Тому перед препаруваннямформалінові препарати поміщають у слабко аміачну воду (для усунення запаху) та працюють у гумових рукавичках.
Етиловий спирт.Фіксуюча дія здійснюється за рахунок відібрання у тканин води та коагуляції білків. Незважаючи на ряд негативних властивостей спирту (зморщування клітин в результаті швидкого відібрання води, розчинення та екстракція жирів і гемоглобіну), він як фіксатор знаходить широке застосування в мікроскопічній техніці. Це тим, що етиловий спирт здійснює швидку фіксацію, що не вимагає після себе зневоднення тканин перед заливкою в парафін і целлоидин. Будучи хімічно неактивною речовиною спирт особливо придатний при гістохімічних дослідженнях. У ньому повністю зберігаються такі речовини, як муцини, глікоген, сечова кислота, залізо, кальцій, які легко розчиняються в інших фіксуючих рідинах.
Метиловий спирт (метанол).Безбарвна рідина, в чистому вигляді нагадує по запаху етиловий спирт, технічний же (неочищений) метанол має неприємний запах, обумовлений домішкою інших речовин. У мікроскопічній техніці застосовується як абсолютного, позбавленого домішок спирту, для фіксації мазків крові. Найкраще користуватися метанолом, призначеним для аналізу.
Слід пам'ятати, що метанол є сильною отрутою та вимагає дотримання правил вживання та зберігання, передбачених для отруйних речовин групи А. З інших фіксуючих речовин слід згадати ацетон, сулему, солі важких металів (ртуть, кобальт, платина, уран тощо). і кислоти (оцтова, трихлороцтова, пікринова, осмієва, хромова та ін). У чистому вигляді ці речовини застосовуються рідко, але є складовою багатьох фіксуючих сумішей.