МФА (Метод флуоресціюючих антитіл)
Метод флуоресціюючих антитіл (МФА) (інакше реакція імунофлуоресценції – РІФ) використовується для виявлення антигенів у біологічних об'єктах (мікроорганізмах, рідинах) за допомогою антитіл, помічених флуоресцентними барвниками.
Перший люмінесцентний мікроскоп з кварцовою оптикою було сконструйовано ще 1908г. Келером та Зідентопфом. Сам метод імунофлуоресценції був винайдений у 1942р. А. Кунсом, який синтезував органічний барвник флуоресцеїн-4-ізоціанат, і розробив методику його кон'югування з сироватковими білками.
Розрізняють прямий (ПМФА) або реакція прямої імунофлуоресценції (РПІФ), розроблений. А Кунсом та Каплан. Непрямий (нМФА) метод флуоресціюючих антитіл або реакція непрямої імунофлуоресценції (РнІФ) розроблений Кунсом і Віллером і, як різновид останнього нМФА з комплементом.
ПМФА використовується з метою виявлення антигенів у біологічних пробах на основі відомих сироваток.
"+++++" - Яскрава, сяюча флуоресценція;
"+++" - Виразно виражена, досить яскрава флуоресценція;
"++" - флуоресценція слабка, але морфологія клітин та колір люмінесценції виявляється досить чітко;
"+" - флуоресценція дуже слабка, морфологія клітин помітна погано;
НМФА використовується з метою виявлення специфічних антитіл у біологічних пробах.
Методика нМФА. При проведенні нМФА на відомий, фіксований на склі антиген, наносять сироватку і протягом 30 хв. мазки із нанесеною сироваткою витримують у вологій камері при +37°С. Потім наносять антивидовий (відповідний випробуваній сироватці) люмінесцентний гамма-глобулін і знову витримують у вологій камері. Далі препарати промивають, висушують та досліджують люмінесцентноюмікроскопії. Титром сироватки вважають те найбільше її розведення, яке обумовлює свічення на "++", за наявності свічення на "+++" або "++++" у попередньому розведенні.
Модифікацією нМФА є нМФА з комплементом. У цьому випадку до сироватці, нанесеної на антиген, додається комплемент, а до нього вже антикомплементарна люмінесцентна сироватка.
Перевагою непрямих методів є наявність лише видових люмінесцентних сироваток. При цьому реакція стає більш громіздкою через велику кількість необхідних контролів. До недоліків всіх видів РІФ відноситься обмежена чутливість через наявність можливих перехресних реакцій між близькими за антигенним складом об'єктами та неспецифічна флуоресценція внаслідок адсорбції флуоресцентної сироватки на різних елементах препарату.
РІФ застосовується в даний час для ідентифікації збудників різних вірусних інфекцій, сказу, коліентеритів, дизентерії, гепатиту, черевного тифу та паратифів, холери, кашлюку, чуми, туляремії, бруцельозу, сибірки, сифілісу, токсоплазми.
Для лабораторних досліджень використовуються комерційні стандартні кон'югати, що містять глобуліни до антигенів, що досліджуються.
1. Р. Кірк Д. Бонагур Сучасний курс ветеринарної медицини Кірка. М., "Акваріум" 2005р.
2. Х.Г. Німанд П.Ф. Сутер Хвороби собак. М., "Акваріум" 1998р.
3. Бусигін К.Ф. Люмінесцентна діагностика інфекційних хвороб тварин М., "Колос" 1975р.
4. Сюрін В.М Самуйленко А.Я. та ін. Вірусні хвороби тварин. М., ВНІТІБП 2004р.
5. Ветеринарна мікробіологія та імунологія під ред. Проф. Н.А.Радчука М., "Агропромиздат" 1991р.