Приготування та вивчення мазків-відбитків -ЧИТАЛЬНИЙ ЗАЛ
Завдання 1.Цитологічний аналіз гнійного ексудату.
Обладнання: предметні стекла, мікроскопи; стерильні ватяні тампони; термостат; спирт-ректифікат (65 мл); спирт метиловий абсолютний (65мл); фарба Романовського-Гімзи (120 мл); імерсійне масло (6 мл); піддослідні тварини з гнійною раною.
Постановка досвіду. Цитологічну картину запального ексудату вивчають при отриманні ранових відбитків за М. П. Покровською та М. С. Макарову. У хірургічній клініці заздалегідь підбирають хвору тварину з рановою поверхнею, покритою гнійним ексудатом.
Звичайним способом, як і для гематологічних досліджень, готують предметні скла. Під час проведення лабораторних занять добре вимиті та знежирені предметні шибки опускають у спирт (96%-ний), потім виймають, залишки спирту підпалюють. Після охолодження скло готове для використання для приготування ранових відбитків. При великій кількості гною, що покриває рану, його видаляють за допомогою вологих стерильних ватних тампончиків. Після цього поверхня скла, відступивши 1 см від вузького краю, прикладають до запаленої тканини. Пересуваючи скло, послідовно наносять кілька мазків-відбитків. На склі залишаються тканинні клітини, клітини ексудату та мікроорганізми. При отриманні мазків не слід проводити склом на поверхні рани і тим самим попереджати можливість пошкодження клітинних елементів ексудату. Щоб не спотворити картини взаєморозташування фагоцитів і мікроорганізмів, що іноді розташовуються гніздами, потрібно злегка доторкнутися склом до обраної ділянки рани і відразу відібрати його в положенні, суворо перпендикулярному до ранової поверхні. Для повноти характеристики ранового процесу відбитки краще робити з різних ділянок вогнищапошкодження, наприклад, від центру до периферії.
Отримані ранові мазки-відбитки сушать, потім фіксують протягом 5 хв метиловим спиртом (етиловим спиртом рівної суміші з етиловим ефіром протягом 15 хв). Фіксовані та висушені в термостаті або на повітрі препарати фарбують методом Романовського-Гімзи.
При мікроскопуванні пофарбованих мазків-відбитків звертають увагу на наявність нейтрофілів різного ступеня зрілості, мікро- та макрофагів, що фагоцитують збудників запального процесу. Встановлюють активність фагоцитів у різних ділянках рани.
По цитограм ранових відбитків можна визначити активність захисних і регенераторних реакцій організму, ступінь бактеріальної обсіменіння і патогенності мікроорганізмів, що інфікують рану. Перелічені чинники зумовлюють динаміку загоєння ран. Виявлення поліморфно-ядерних нейтрофільних лейкоцитів, що активно фагоцитують збудників інфекційного процесу, свідчить про високу активність фагоцитарної реакції. У пізнішому періоді загоєння рани гарною ознакою вважається виявлення великої кількості макрофагів - моноцитарних клітин.
Оформлення протоколу досвіду. Записують методику виготовлення мазків-відбитків. Наголошують на результатах цитологічного аналізу випробуваного ексудату, обговорюють їх і роблять висновки.
Питання контролю знань:
1. Запалення. Визначення поняття. 2. Етіологічні чинники, які викликають запалення. 3. Зовнішні ознаки запалення та його характеристика. 4. Розлади кровообігу та мікроциркуляції у зоні запалення. 5. Характеристика порушень обміну речовин у вогнищі запалення. 6. Роль біологічно активних речовин у патогенезі запалення. 7. Класифікація запалень. 8. Види ексудату. 9. Види гнійного запалення. 10.Еміграція лейкоцитів при запаленні, основні теорії, що пояснюють це. 11. Вчення про фагоцитоз. Завершений та незавершений фагоцитоз. 12. Властивості ексудату. 13. Класифікація запалень з переважання альтерації, ексудації та проліферації. 14. Запалення як реакція цілісного організму на ушкодження. 15. Патогенез запалення. Характеристика стадій альтерації, ексудації та проліферації. 16. Результати запалення. 17. Біологічна роль запалення. 18. Особливості перебігу запалення в основних видів сільськогосподарських тварин (коней, великої рогатої худоби, свиней та птахів).