Реассортантний штам вірусу грипу rn 1
Винахід відноситься до медичної вірусології та стосується реассортантного діагностичного штаму RN1/09-swine A(H7N1). Представлений штам отримано шляхом схрещування апатогенного вірусу грипу коней А/коня/Прага/1/1956(H7N7) з холодоадаптованим вакцинним штамом А/17/Каліфорнія/09/38(N1) на основі донора 17/4 (Н2N2) і містить нейрамінідазу вірусу пандемічного грипу А//Каліфорнія/07/09(Н1N1) та гемаглютинін вірусу грипу коней А/коня/Прага/1/1956(Н7N7). Штам RN1/09-swine A(H7N1) депоновано у Державній колекції вірусів Установи української Академії Медичних наук Інституту вірусології ім. Д.І.Івановського РАМН за номером ДКВ № 2473 і може застосовуватися для виявлення антитіл до нейрамінідази N1 вірусу грипу. 2 іл., 4 табл.
Малюнки до патенту Україна 2428476
Винахід відноситься до медичної вірусології та може бути використане в охороні здоров'я для діагностичних цілей при грипозній інфекції, а також для оцінки імуногенності при вакцинації вакцинами грипозними.
У міру створення нових грипозних вакцин проти пандемічних штамів виникає необхідність використання додаткових ефективних та доступних критеріїв оцінки імуногенності вакцинних штамів.
Для визначення антитіл до нейрамінідази вірусу грипу раніше застосовувалися реассортантні штами на основі вірусу грипу А/кінь/Прага/1/56(Н7N7), що містять нейрамінідазу епідемічних вірусів людини A(H1N1) та A(H3N2) [Зап. вірусології. – 1985. – № 1, – стор.35-39]. При цьому використовувався тест інгібіції елюції, заснований на блокуванні антитіл сіалідазної активності нейрамінідази,яку оцінювали за затримкою елюції попередньо аглютинованих вірусом грипу еритроцитів.
В даний час у циркуляції з'явилися нові варіанти вірусів грипу, такі як вірус свинячого походження А(Н1N1) та пташині віруси А(Н5N1), у зв'язку з чим виникла потреба у розробці нових діагностичних штамів, що містять відповідну нейрамінідазу.
Завданням, на вирішення якого спрямований винахід, є отримання реассортантного штаму, що містить нейрамінідазу N1 пандемічного вірусу свинячого походження А/Каліфорнія/07/09(Н1N1). Реассортантний штам -RN1/09-swineA(H7N1)отриманий методом класичної генетичної реассортації в курячих ембріонах (КЕ), що розвиваються, вірусу А/коня/Прага/1/1956(Н7N7) і вакцинного штаму А/17/Каліфорнія/09/38(N1N1) з наступною селекцією при зниженій до 25°С температурі в присутності поліклональних антитіл до гемаглютиніну вірусу грипу Н1.
Вакцинний штам А/17/Каліфорнія/09/38(N1N1), отриманий з колекції відділу вірусології НДІЕМ СЗО РАМН, був реасортантом з формулою геному 6:2 на основі холодоадаптованого донора атенуації А/Ленінград/27/17/27 містив поверхневі антигени НА та NA від пандемічного вірусу А/Каліфорнія/07/09(Н1N1).
Вірус А/кінь/Прага/1/1956(Н7N7) був отриманий з центру контролю та попередження захворювань США (Атланта, Джорджія).
РеассортантRN1/09-swine А(Н7N1)успадкував ген NA від штаму А/Каліфорнія/07/09(Н1N1). На фіг.1 представлений приклад аналізу гена NA за допомогою полімеразно-ланцюгової реакції (ПЛР) з набором праймерів, специфічних для нейрамінідази підтипів N7 та N1. Доріжки мають таку відповідність: 1 - ДНК-маркер (100 bp), 2 - А/кінь/Прага/1/1956(Н7N7), 3 - А/17/Каліфорнія/09/38(N1N1), 4 -RN1/09-swine A(H7N1), 5 А/кінь/Прага/1/1956(Н7N7), 6 - А/17/Каліфорнія/09/38(N1N1), 7 - RN1/09-swine A(H7N1) . Наявність ампліфікації реасортанту RN1/09-swine (4-а доріжка) (H7N1) з праймерами N1 подібно до батьківського штаму А/17/Каліфорнія/09/38 (3-а доріжка) і відсутність ампліфікації з праймерами N7 (7-а доріжка) свідчать про ідентичність гена NA реасортанту RN1/09-swine та штаму А/Каліфорнія/07/09(Н1N1).
ПЛР-рестрикційний аналіз шести генів неглікозильованих білків [J. Virol. Метод. - 1995. - № 55. - Р.445-446] показав, що вони були успадковані від аттенуированного донорського штаму A/Ленингpад/134/17/57(H2N2). Приналежність гемагглютиніна реассортанта батьківському штаму A/кінь/Прага/1/56(H7N7) підтверджена реакції гальмування гемагглютинації (РТГА).
Відсутність перехресних реакцій реассортантного штаму A(H7N1) з епідемічними вірусами A(H1N1) та A(H3N2) продемонстровано у РТГА із сироватками волонтерів, щеплених сезонною тривалентною живою грипозною вакциною (ЖГВ). Показано, що до компонентів вакцини A(H1N1) та A(H3N2) після щеплення спостерігаються прирости антитіл, при цьому у тих же волонтерів перехресно-реагуючі антитіла до кінського вірусу A(H7N7) відсутні (див. таблицю 1).