Роль біохімічних методів у сучасній лабораторній діагностиці
Вчені в описі методів біохімічної діагностики
Основи титриметричного методу було закладено ще середині XVIII століття. У 1726 р.К. Ж. Жоффруа здійснив нейтралізацію кислот в аналітичних цілях.
До 1750 р. як титрант стали використовувати розчин з відомою концентрацією, а індикатором служив фіалковий екстракт. У 1795 р. було запропоновано метод визначення гіпохлориту.
Ж. Л. Гей-Люссак пізніше запропонував індиго як індикатор для окислювально-відновного титрування. Він запровадив і термін "титрування".
Класичні методи імунохімічного аналізу, описані ще наприкінці XIX ст.
У 1809 роціРейс і Страхов відкрили явища електрофорезу та електроосмосу.
Електрофорез у крохмальному гелі запропонований О.Смітісом.
Електрофорез у поліакриламідному (ПААГ) гелі запропонованийЛ.Орнстейном та Д.Девісом.
Явище оптичної активності відоме початку XIX століття. Саме з відкриття оптичної активності (Ж. Біо, 1815 ) почала розвиватися стереохімія. У її вивчення головний внесок зробили французькі вченіД.Араго, Ж.Біо, Л.Пастер, Е.Коттон, О.Френель.
Практичні спроби кількісного визначення каламутності відносять до 1900 року, коли Уіпп і Джексон розробили стандарт суспензії, що містить 100 мільйонних часток кізельгура (діатомітової землі) в дистильованій воді. Розведення цієї суспензії дозволило створити так звану кремнеземну шкалу мунтності на основі ряду стандартних суспензій для калібрування турбідиметрів того часу.Джексон скористався шкалою для роботи з існуючим тоді приладом діафанометром і створив те, що відомо під назвою"Свічковий турбідиметр Джексона".
Хроматографічний метод аналізу був вперше застосований українським вченим-ботанікомМихаїлом Семеновичем Цвєтом у 1900 році. Він використовував колонку, заповнену карбонатом кальцію для поділу пігментів рослинного походження.
1952 рокуДж. Мартіну і Р. Сінджу було присуджено Нобелівську премію з хімії за створення методу розподільчої хроматографії.
Спектрофотометричні методи у визначенні БЖУ
Спектрофотометричний метод аналізу - заснований на поглинанні монохроматичного випромінювання, тобто випромінювання з однією довжиною хвилі у видимій та УФ областях спектру.
Спектрофотометричний метод визначення сечовини
Уреазний метод. Ферментативні методи базуються на гідролізі сечовини уреазою в інкубаційному середовищі на вуглекислий газ та аміак. Аміак, що утворився, можна визначити за високочутливою і специфічною реакції з фенолгіпохлоритом і каталізатором нітропукраїнсидом, по саліцилатно-гіпохлоритній реакції, по реакції з реактивом Несслера (є в 10 разів менш чутливою в порівнянні з фенолгіпохлоритною, малоспецифічною). ) .
Спектрофотометричний метод визначення ПВК
Ензимний метод. Піровиноградна кислота під впливом лактатдегідрогенази (ЛДГ) відновлюється в молочну. При цьому відбувається окислення відновленого нікотинамідадешшдинуклеотиду (НАД • І»): щодо зміни оптичної щільності реакційної суміші і можна судити про концентрацію піровиноградної кислоти.
Спектрофотометричний метод визначення вуглеводомістких білків
Глікозильований гемоглобін. Фруктоза, що входить до складу стабільної формиглікозильованого гемоглобіну дегідрується фосфорною кислотою з утворенням 5-оксиметилфурфуролу, який взаємодіє з тіобарбітуровою кислотою з утворенням пофарбованого комплексу з максимальним поглинанням при 443 нм.
За механізмом взаємодії
- Розподільча; Іонообмінна; Адсорбційна; Ексклюзивна; Афінна; Опадова
За метою проведення
- аналітична; Напівпрепаративна; Препаративна; Промислова
Ліпіди та РК визначають методомтонкошарової хроматографії: Для хроматографування вищих жирних кислот та їх похідних застосовують незакріплений шар силікагелю та окису алюмінію, а також шар силікагель-гіпс. Колонковий спосіб хроматографування використовується для препаративного поділу.
Газорідинна хроматографія: Для аналізу використовують не самі жирні кислоти, а їх похідні - метилові ефіри.
Білки та вуглеводи цим методом визначаються рідко
Роль біохімічних методів у сучасній лабораторній діагностиці
Часто зовнішні прояви багатьох різних хвороб дуже схожі, і лише проведення низки лабораторних аналізів дозволяє встановити точний діагноз. Також вона допомагає у виборі найбільш ефективного лікування. На цьому етапі слід порівняти лабораторні показники до, під час та після проведеного лікування. Поряд з більш сучасними напрямками, такими як ІФА-діагностика та ПЛР-діагностика, не варто забувати про загальноклінічні та біохімічні дослідження. Незважаючи на те, що ці методики розроблені ще в минулому столітті, завдяки сучасній апаратурі вони дають змогу в дуже короткий термін оцінити стан пацієнта.
Біохімічні показники крові. Щоб отримати повне уявлення про роботутого чи іншого органу тіла людини, не одне десятиліття успішно застосовують метод біохімічного аналізу крові. Це один із способів лабораторної діагностики, який дуже інформативний для лікаря та відрізняється високим ступенем достовірності. Біохімічний аналіз крові не тільки розкриє повну картину функціонування того чи іншого органу, але й розкаже, чи відчуває людина нестачу в тому чи іншому мікроелементі чи вітаміні. Будь-яка зміна в хімічному складі крові свідчить про неблагополучну ситуацію та необхідність термінового втручання. У сучасній лабораторній діагностиці величезну роль у визначенні біохімічних показників грають біохімічні аналізатори, що дозволяють найточніше визначити показники біохімії крові.
Відомо дуже багато біохімічних показників крові, що відбивають роботу ліпідного, вуглеводного, білкового обміну речовин. Зупинимося докладніше найбільш вживаних їх.
Показники вуглеводного обміну. Вимірювання глюкози в крові є основним лабораторним тестом у діагностиці діабету. Дослідження проводять натще, щонайменше ніж через 8 годин (!) після останнього прийому їжі. Необхідно виключити підвищені психоемоційні та фізичні навантаження. У частини пацієнтів деякі ознаки дозволяють запідозрити початкову чи приховану форму порушення обміну вуглеводів. У цих випадках виявити приховані порушення вуглеводного обміну допомагає глюкозотолерантний тест з визначенням глюкози натще і після прийому певної кількості глюкози. Призначає дослідження та контролює його лікар-ендокринолог.
Ліпідний обмін. У регуляції ліпідного обміну значну роль відіграють центральна нервова система, а також багато залоз внутрішньої секреції (статеві, щитовидні залози, гіпофіз,надниркові залози). У сучасній лабораторії визначають концентрацію наступних ліпопротеїнів крові:
1. Загальний холестерин
2. Ліпопротеїни високої щільності (ЛПЗЩ),
3. Ліпопротеїни низької щільності (ЛПНЩ).
4. Тригліцериди (ТГ)
Білковий обмін. Найважливішим показником білкового обміну є загальний білок крові. Білки плазми виконують безліч функцій в організмі, і рівень білка є одним з найважливіших лабораторних показників. Концентрація загального білка в сироватці залежить, в основному, від синтезу та розпаду двох основних білкових фракцій – альбуміну та глобулінів. На рівень загального білка можуть впливати положення тіла та фізична активність. Головним кінцевим продуктом білкового обміну є сечовина. Рівень їх у крові обумовлений співвідношенням процесів освіти та виведення. У клінічній діагностиці визначення сечовини у крові зазвичай використовують із оцінки видільної функції нирок.
Як видно, всі показники крові (загальноклінічні, біохімічні) перебувають у тісному взаємозв'язку один з одним. Тому оцінити стан організму за одним показником неправильно. Слід проводити дослідження у комплексі, щоб отримати найточнішу картину порушень та застосувати адекватне лікування.