Спосіб визначення фенобарбіталу в біологічних рідинах
Винахід відноситься до біохімії. Ціль винаходу - підвищення чутливості способу. У пробірку з плазмою крові вносять фенобарбітал, додають ацетатний 0уфер і хлороформ. Після центрифугування відокремлену органічну фазу вьтарюють. Осад розчиняють у хлороформі та наносять на платівку. Хроматографічний поділ фенобарбіталу дять висхідним способом на пластинках із закріпленим шаром силікагеля, Розподіл проводять при подвійному хроматографуванні в системі хлороформ - діетиловий ефір. Після висушування виявляють хроматограма 1 насиченим розчином нітрату закисної ртуті. Денситометрично проводять кількісну оцінку хроматограм. S (Л З С5 .
РЕСПУБЛІН д 11 4 Про 01 Б 33/48
К А ВТОРСЬКОМУ, Ф СВІДЧЕННЯМ
ДЕРЖАВНИЙ НОМІТЕТ СРСР
ПО СПРАВАХ ВИНАХОДІВ І ВІДНРИТТІВ (21 ) 3744097/28-14 (22) 28.05.84 (46) 15.06..88. Бюл. У 22 (71) Інститут клінічної та експериментальної неврології (72) Ф.Г.Ветрогон, В.M,Îêóäæàsà, З.І.Антадзе та Л.І.Сіоридзе (53) 612.015 (088.8) (56) I.Christiansen. Determination
Гідроксиметаболітів Фенобарбітона і Фенітоіна. вЂ" Хп: Clinical
Pharmacology of Antiepileptic Drugs °
N.I.Berlin, 1975, р.131-134. (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ ФЕНОБАРБІТАЛУ В БІОЛОГІЧНИХ РІДИНАХ (57) Винахід відноситься до біохімії. Пель винаходу вЂ" підвищення
„„SU„„1402943 А 1 чутливості способу. У пробірку з плазмою крові вносять фенобарбітал, додають ацетатний руфер і хлороформ. Після центрифугування відокремлену органічну фазу випарюють.
Осад розчиняють у хлороформі та наносять на платівку. Хроматографічне поділ фенобарбіталу проводять висхідним способом на пластинках із закріпленим шаром силікагйлю.
Розподіл проводять при подвійномухроматографування в системі хлороформ вЂ" діетиловий ефір. Після висушування виявляють хроматограми насиченим розчином нітрату закнсної ртуті. Денситометрично проводять кількісну оцінку хроматограм.
140? 943 єс (a-Ь)
ВН16111І За=, ç "851/34
Тираж 847 Передплатне
Произв.-полигр. пр-тя, м. Ужгород, вул. Проектна, 4
Винахід відноситься до медицини і може бути використане для виявлення фенобарбіталу н біологічних рідинах.
Білизна винаходу є підвищення чутливості способу.
приклад. Беруть дві центрифужні пробірки. У першу пробірку поміщають 0,2 мл плазми крові або спинно- 10 мозкової рідини, у другу вЂ" 0,2 мл розчину із заданою кількістю фенббарбіталу. Таку ж кількість фенббарбіталу вносять у пробірку з плазмою крові. Надалі обробку со- !5 д ржимого обох пробірок проводять .однаково. Додають 0,1 мп ацетатного буфера (рН 4,5) та 2,5 мл хлороформу1. Пробірки збовтують протягом
1 хв, потім центрифугують 5 хв ° 20
Відокремлену органічну фазу поміщають на фарфорову чашку і випаровують. ють на водяній бані при 55 С. Осад, що залишився розчиняють в 0,2 мл хлороформу і наносять на платівку в 25 лихачестве 0,02 мл. Хроматографічне відділення фенобарбіталу здійснюється висхідним способом на платівка х із закріпленим шаром силікагелю.
Розподіл проводять при подвійному хроматографуванні в системі хлороформ дйетилового ефіру (3:1) при довжині.
100мм. Повторне хроматографування проводять через 20 хв після першого відділення, попередньо висушивши
35 п астинку при кімнатній температурі.
Отримані хроматограми після висушування виявляють насиченим розчином нітрату закисної ртуті, який утворюється з фенобарбіталом.пофарбоване 40 з'єднання, що проявляється на пластинках у вигляді плям з різною інтенсивністю забарвлення (від світлих до темно-сірих) на білому тлі. Кількісну оцінку хроматограм проводять ден-А5 сйтометрично.
Вимірюють площі піків заданої кількості фенобарбіталу (Ь) і крові або спинномоегової рідини із заданою кількістю фенобарбіталу (а).
Різниця між цими піками дає площу піку біолітичної рідини
Ь-е=с:m, де е вЂ" кількість фенобарбіталу в заданій пробі, мкг;
m " "кількість фенобарбіталу в дослідній пробі біологічної рідини, мкг.
Якщо позначити кількість біологічної рідини, взятої для обробки, через d, то кількість фенобарбіталу на 1 мл дорівнює
Якщо задана кількість фенобарбіталу (е) дорівнює 50 мкг, площа піку спинномозкової рідини + 50 мкг фенобарбіталу, введеного в пробу (a) 3735 мм, площа піка проби, що містить 50 мкг фенобарбіталу (Ь)
3680 мм, кількість взятої для ана" лізу спинномоегової рідини (d)
Чутливість методу за відомим способом становить 40-45 мкг, а за пропонованим вЂ" 1,2 мкг.
Спосіб визначення фенобарбіталу в біологічних рідинах шляхом екстрагування проби органічним розчинником, центрифугування, ви-, парування органічної фази, розчин- . ріння залишку в. органічному розчиннику, тонкошарової хроматографії і денситометрування, о, т л ивЂ" ча а ю шийся тим, що, з метою підвищення чутливості способу, поділ проводять за допомогою тонкошарової хроматографії з застосуванням внутрішнього стандарту і з використанням" системи розчинників хлоро- форм вЂ" діетиловий ефір.