Диско-дифузійний метод

Диско-дифузійний метод – розділ Хімія, Мікробіологічні основи хіміотерапії бактеріальних інфекцій. Антисептика На Поверхню Щіль.

На поверхню щільного живильного середовища, засіяного суцільним газоном досліджуваної культурою, накладають не більше 6 дисків, просочених антибіотиками, на відстані не менше 2 см один від одного. Реєстрація результатів проводиться через 18-24 годин інкубування в термостаті діаметром зони відсутності зростання навколо дисків з антибіотиками. Наявність зростання навколо диска свідчить про нечутливість цього мікроба до антибіотика. Для інтерпретації результатів використовують спеціальні таблиці.

Рисунок 1. Визначення чутливості

мікроорганізмів диско-дифузійним методом:

1 - мікроорганізмчутливий до антибіотика;

2 – мікроорганізмпомірно резистентний до антибіотика;

3 - мікроорганізмстійкий до антибіотика.

Метод Е-тестів Принцип методу. Визначення чутливості мікроорганізму проводиться аналогічно до тестування диско-дифузійним методом. Відмінність полягає в тому, що замість диска з антибіотиком використовують смужку Е-тесту, що містить градієнт концентрацій антибіотика від максимальної до мінімальної. У місці перетину еліпсоподібної зони пригнічення росту зі смужкою Е-тесту набувають значення мінімальної переважної концентрації (МПК).

Рисунок 2. Визначення чутливості мікроорганізмів за допомогою Е-тестів

Метод серійних розведень у бульйонному середовищі Беруть 9 пробірок, що містять 1 мл бульйону Мюллер-Хінтона. Одна їх служить контролем зростання бактерій, а інших готують дворазові серійні розведення антибактеріального препарату. Наприклад, 32 мг/л – 1-а, 16 мг/л – 2-а, 8 мг/л – 3-я, 4 мг/л – 4-а тощо. Потім у кожнупробірку вносять 0,1 мл бактеріальної суспензії. Посіви інкубують при 37°С протягом 18-24 год., відсутність помутніння середовища свідчить про затримку зростання бактерій у присутності концентрації препарату.

Малюнок 3. Визначення значення МПК методом розведення в рідкому живильному середовищі

Мінімальна переважна концентрація (МПК) – найменша концентрація антибіотика (мкг/мл або мг/л), яка in vitro повністю пригнічує видиме зростання бактерій.

2► Визначення чутливості різних штамів стафілококів до антибіотиків методом стандартних дисків

АнтибіотикЗона придушення росту, ммХарактеристика штаму
1. Оксацилін
2. Ко-тримоксазол
3. Рифампіцин
4. Еритроміцин
5. Ванкоміцин
6. Ципрофлоксацин

Досліджувана культура є чутливою (S), помірно стійкою (I), стійкою (R) _.

Достоїнства методу:Легко відтворюваний методНедоліки методу :якісний метод, що не дозволяє визначити МПК препарату./

3►Визначення мінімальної переважної концентрації (МПК) пеніциліну методом серійних розведень.

Висновок: МПК пеніциліну для досліджуваного штаму становить (див. малюнок № 3)4 мг/мл

Переваги методу:кількісний, дозволяє визначити МПК препарату

Недоліки методу:трудовостворюваний метод

4►Виявлення та реєстрація антагоністичної дії різних видів бактерій.

На чашку з МПА штрихом діаметром засівається мікроб-антагоніст і перпендикулярно до нього тест-штами. Облік результатів проводиться за добупісля посіву. Наявність та ступінь антагоністичної дії визначають за величиною зон затримки зростання тест-культур.

Штриховий посівВасіллюс polymyxa

Висновок: найбільша антагоністична дія виявлена ​​до тест-штамів (вкажіть види)