МЕТОДИ ЛАБОРАТОРНОЇ ДІАГНОСТИКИ ЧУМИ

РОЗДІЛ 2: приватна мікробіологія

МЕТА ЗАНЯТТЯ:

навчальні:

• дати поняття про правила забору, зберігання та транспортування досліджуваного

• сформувати знання про поживні середовища, необхідні діагностики чуми;

• навчити методику бактеріологічної діагностики чуми;

ЗАВАННЯ.

1. Одягти протичумний костюм.

1. Зробити мікроскопію препаратів пофарбованих за Грамом, метиленовою синькою. Результати замалювати.

1. Забарвити препарат люмінесцентною сироваткою.

1. Вивчити морфологію колоній чуми на щільному середовищі та зростання в рідкому живильному середовищі. Замалювати.

1. Поставити прискорений спосіб проби з бактеріофагом.

1. Здійснити облік ферментативного ряду.

КОНТРОЛЬНІ ПИТАННЯ.

1. До якої групи інфекцій належить чума?

2. Хто є переносниками та джерелом чуми?

3. Які форми захворювання викликає Yersiniae pestis?

4. Як росте збудник чуми на щільних і рідких живильних середовищах? Яка форма є вірулентною?

5. Який токсин виробляє збудник чуми?

ТЕМА: “Мікробіологічна діагностика чуми”.

МЕТА ДОСЛІДЖЕННЯ : виявлення збудника чуми.

Збудник чуми:Yersiniae pestis.

Матеріал для дослідження:

1) Вміст бубонів (бубонна форма);

2) вміст виразки або карбункула (шкірна форма);

3) Мокрота (легенева форма);

4) Випорожнення (кишкова форма);

5) Кров (за всіх форм);

6) Секційний матеріал (шматочки органів, трупа, кров, кістковий мозок);

7) Блохи - вміст їх кишечника;

8) Щури, миші та ін. загиблі (іхворіють) гризуни – розкривають, досліджують органи та кров.

Способи збору матеріалу:

Вміст бубонів, виразки чи карбункула беруть стерильним шприцом. Мокроту, випорожнення збирають у стерильну широкогорлу банку. Кров 3-5мл беруть стерильним шприцом і засівають біля ліжка хворого на бульйон.

Основні методи дослідження:

1. Експрес-методи: МФА та РНДА;
2. Мікроскопічний;
3. Бактеріологічний;
4. Біологічний.

День дослідження.

1) мікроскопічний метод.

З матеріалу, що надійшов, готують мазки, висушують на повітрі, фіксують у суміші Никифорова 15-20 хвилин. Мазок забарвлюють за Грамом та метиленовим синім для виявлення біполярності. Наявність у мазках грамнегативних паличок овоїдної форми, а при фарбуванні метиленовим синім – наявність біполярності дає право поставити попередній діагноз.

2) Бактеріологічний метод.

Матеріал засівають у МПБ та МПА. Для придушення зростання сторонньої мікрофлори до МПА додають генціанвіолет (1:50000). Як стимулятори росту додають кров або сульфіт натрію рН = 7,0-7,2. Посіви інкубують у термостаті при 28 – 30°С.

День дослідження.

Вивчають зростання на щільному та рідкому поживному середовищі.

На МПБ спостерігається сталактитове зростання (з поверхні середовища спускаються пухкі нитки). З бульйонної культури роблять мазки, фарбують за Грамом і метиленовим синім.

На МПА через 18-24 години під мікроскопом за малого збільшення можна побачити колонії як «битого скла». Через 48год – «мереживні хусточки», у центрі колонії зернистість.

Підозрілі колонії знімають на скошений МПА і поміщають у термостат виділення чистої культури.

Паралельно ставлять пробу із фагом. На 2-3підозрілі щодо збудника чуми колонії завдають чумний бактеріофаг. Інкубують у термостаті. Через 10-12год колонії змінюються - лізуються.

День дослідження.

Вивчають культуру, що виросла на скошеному МПА. На поверхні агару чумна паличка утворює в'язкий сірувато-білий наліт. Потім проводять:

2) Вивчення біохімічних властивостей. Сахаролітичні властивості перевіряють посівом на цукри: глюкозу, сахарозу, маніт, мальтозу, рамнозу, арабінозу;

3) ставлять пробу з фагом (посів газоном + доріжка із чумного бактеріофага, t = 28 0 С).

---