Спосіб виявлення мікобактерій туберкульозу.
Винахід відноситься до галузі мікробіології та може бути використане для виявлення мікробактерій туберкульозу. Спосіб заснований на обробці патологічного матеріалу та його посіві на щільне живильне середовище. Патологічний матеріал перед посівом обробляють препаратом "Плівасепт" концентрацією 0,08%, змішаним ферментом імозімазою у співвідношенні 100:1 відповідно доведенням рН суміші введенням бікарбонату натрію до 7,2-8,2. Обробку проводять протягом 18-24 год при 29-31 o C при рівних об'ємних співвідношеннях матеріалу та суміші. Спосіб дозволяє знизити кількість непідтверджених посівом виявлень мікобактерій туберкульозу методом ЛЮМ, зменшити кількість зразків, у мазках яких знаходять лише поодинокі мікобактерії туберкульозу. 4 табл.
ОПИС ВИНАХОДУ ДО ПАТЕНТУ
Винахід відноситься до мікробіології і може бути використане для виявлення мікобактерій туберкульозу в патологічному матеріалі від людей і тварин.
Вже відомий спосіб виявлення мікобактерій туберкульозу, що включає обробку патологічного матеріалу сірчаною, соляною, щавлевою кислотами або лугами з наступним посівом на щільні живильні середовища (1).
Відомий також спосіб виявлення мікобактерій туберкульозу методом люмінесцентної мікроскопії (ЛЮМ), що включає обробку патологічного матеріалу протягом 20 - 24 годин розчином тринатрій фосфату, посів на щільне живильне середовище з подальшим виготовленням мазків та їх забарвленням сумішшю аураміну і порід . Однак відомий спосіб складний у здійсненні, оскільки вимагає коригування pH перед посівом патологічного матеріалу і перед виготовленням мазків ЛЮМ. Крім того, пари тринатрій фосфату дратують дихальні шляхи обслуговуючого персоналу,псують обладнання; а його розчин вилуговує скляний посуд, роблячи його непридатним до вживання.
Як прототип розглядається спосіб виявлення мікобактерій туберкульозу методом посіву та ЛЮМ, що включає використання для обробки посівного матеріалу хлоргексидину біглюконікуму в концентрації 0,05 - 0,2% протягом 20 - 24 год (4).
Розглянутий спосіб-прототип досить ефективний, проте його використання обмежене, так як дезінфектант, що використовується в способі-прототипі, слабо руйнує некротизовані тканини, що ускладнює вихід з них в осад мікобактерій туберкульозу, а це негативно впливає на результативність посіву та ЛЮМ.
Мета винаходу - підвищення ефективності при спрощенні та зниженні трудомісткості способу.
Поставлена мета досягається тим, що посівний матеріал обробляють протягом 18 - 24 год при 29 - 37 o C препаратом Пливасепт в концентрації 0,08%, який змішують з ферментом імозимазою у співвідношенні 100:1, а суміші pH доводять введенням натрію бікарбонату до 0 ,7 – 8,2.
Препарат "Плівасепт" 5% - нейтральний розчин з поверхнево-активною речовиною для дезінфекції шкіри та предметів, що випускається фірмою "Плива-Загреб" Республіки Хорватія. 100 мл розчину містить 5 г хлоргексидину глюконату. Плівасепт 5% являє собою злегка жовтуватий розчин, що надає сильну бактерицидну дію на багато грампозитивних і грамнегативних бактерій. При приготуванні відповідних розведень із твердої води поверхнево-активна речовина (оксиетильований жирний спирт) запобігає утворенню осаду. Засіб сприяє кращому проникненню діючої речовини хлоргексидину в глибокі шари шкіри в місці застосування. Пливасепт 5% застосовується в розведенні з водою та етиловим спиртомвідповідних концентраціях. Готові водні розведення Пливасепта 5%, що містять до 1% хлоргексидину глюконату, можна стерилізувати в автовклаві при 120 o C протягом 30 хв. Водні розчини можна готувати у стерильній воді.
Імозімазу (протеолітична активність ПЕ/мл, 60) випускається медико-біологічним центром наукової фірми "Біосиб" (Новосибірськ) у флаконах, що містять 10 мл ферменту.
Відповідно до запропонованого способу 1000 мл препарату "Пливасепт" в концентрації 0,08% змішують з 10 мл ферменту (вміст 1 флакона), тобто. у співвідношенні 100:1 з доведенням pH суміші введенням бікарбонату натрію до 7,2 - 8,2 і її подальшим використанням для обробки патологічного матеріалу, який поміщають в стерильні флакони і заливають рівним об'ємом суміші.
Новизна запропонованого способу полягає у використанні для обробки посівного матеріалу препарату Плівасепт в концентрації 0,08%, який змішують з ферментом імозімазою з доведенням pH суміші введенням в неї бікарбонату натрію до 7,2 - 8,2. Фермент имозимаза довго гідролізують денатуровані білки патологічного матеріалу, залишаючи мікобактерії в життєздатному стані, що підвищує результативність посіву мокротиння, а pH суміші та режими обробки патологічного матеріалу є оптимальними для дії ферменту. У цьому полягає новий технічний результат, який перебуває у причинно-наслідковому зв'язку із суттєвою ознакою. Істотна ознака збігається з характерною.
Спосіб здійснюється наступним чином.
Готують 0,08%-ний розчин препарату Плівасепт, який змішують із ферментом імозімазою у співвідношенні 100:1. В отриману суміш вводять бікарбонат натрію до отримання pH 7,2 - 8,2. Патологічний матеріал поміщають у стерильні флакони, заливають рівним.об'ємом отриманої суміші, гомогенізують на струшувачі і залишають на 18 - 24 год при 29 - 31 o C, висівають на щільне живильне середовище. Посів та фарбування мазків для ЛЮМ проводять без коригування pH посівного матеріалу.
Приклад 1. Здійснення методу.
Розчин для обробки посівного матеріалу готують наступним чином: 16 мл препарату Плівасепт доливають дистильованою водою до 1000 мл, змішують з 10 мл ферменту імозімази і додають 5,0 г бікарбонату натрію, ретельно перемішують. Мокроту, зібрану в спеціальні флакони, заливають рівним об'ємом приготованого розчину, гомогенізують на струшувачі і залишають на 18 - 24 год при 29 - 31 o C. Потім виробляють посів на щільне живильне середовище, виготовлення мазків, які фарбують по ЛЮМ суміші БІЮ.
З 27.01.97 р. по 17.03.97 р. запропонованим способом виявляли мікобактерії туберкульозу у 2030 пробах мокротиння від хворих на туберкульоз людей І групи диспансерного обліку. Результати представлені у таблиці 1.
Приклад 2. Підтвердження здійсненності способу.
Для обробки посівного матеріалу 16 мл препарату Плівасепт доливають дистильованою водою до 1000 мл і ретельно перемішують. Мокроту, зібрану у спеціальні флакони, заливають рівним обсягом приготовленого препарату. Виявлення мікобактерій проводять, як у прикладі 1. Перед посівом та виготовленням мазка коригують pH кожного зразка. У таблиці 2 наводяться результати виявлення мікобактерій у 1100 зразках мокротиння від хворих на туберкульоз людей І групи диспансерного обліку.
У таблиці 3 порівнюються результати виявлення мікобактерій туберкульозу після обробки посівного матеріалу препаратом Плівасепт (приклад 2) та відповідно до запропонованого способу (приклад 1).
Як видно з таблиці 3пропонований спосіб забезпечує скорочення (до 10,4% порівняно з 23,8%) числа позитивних знахідок методом ЛЮМ, непідтверджених посівом.
Приклад 3. Порівняльна ефективність запропонованого та відомого способів.
У таблиці 4 наводяться результати виявлення мікобактерій туберкульозу в 1286 зразках мокротиння від хворих на туберкульоз людей І групи диспансерного обліку та обробкою посівного матеріалу хлоргексидином біглюконікумом у концентрації 0,05%. Перед посівом та виготовленням мазків коригують pH кожного зразка.
З таблиці 4 видно, що запропонований спосіб значно скорочує (до 10,4% порівняно з 23,5%) кількість непідтверджених посівом позитивних виявлень мікобактерій туберкульозу методом ЛЮМ. Крім того, зменшується кількість зразків, у мазках яких знаходять лише поодинокі мікробактерії, що значно підвищує інформативність ЛЮМ. Наявність бактеріальної маси забезпечує вивчення виду мікобактерій та їхньої лікарської чутливості. Проведені дослідження підтверджують ефективність запропонованого способу. Так, поєднання позитивних знахідок методом посіву і методом ЛЮМ становить запропонованому способі 62,8% порівняно з 54,0% у відомому способі.
Джерела інформації, прийняті до уваги: 1. Туберкульоз сільськогосподарських тварин / Под ред. В.П. Шишкова і У. П. Урбана - М.: Агропромиздат, 1991, з. 114 та 115.
2. Про підвищення якості ЛЮМ при дослідженні патологічного матеріалу для виявлення мікобактерій туберкульозу. Методичні рекомендації МОЗ СРСР, - 18.10.89, N 21-08/11-297.
3. Сучасні методи лабораторної діагностики туберкульозу. - М: 1992.
4. Використання ЛЮМ для діагностики бактеріовиділення у хворих на туберкульоз. Методичні рекомендації МОЗ РРФСР таНДІтуберкульозу. - М: 1981.
ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
Спосіб виявлення мікобактерій туберкульозу, що включає обробку патологічного матеріалу і його посів на щільне живильне середовище, відрізняється тим, що обробку патологічного матеріалу здійснюють препаратом "Пливасепт" концентрацією 0,08%, змішаним з ферментом імозімазою у співвідношенні 100 : 1 відповідно до натрію бікарбонату до 7,2 - 8,2, причому патологічний матеріал обробляють зазначеною сумішшю в рівних обсягах протягом 18 - 24 год при 28 - 31 o С.
Головне меню
Статистика сайту
Всього документів:771517
- Заявка на винахід:28087
- Винахід:632828
- Корисна модель:110602
Ви можете безкоштовно розмістити інформацію про свій винахід на нашому сайті. Це допоможе потенційним інвесторам дізнатися про вас та зв'язатися з вами.