ДРТ-Клініка репродуктивної медицини
бійтеся самці
Хромосоми та ДНК
Хімія речовини
Жириновський про штучне запліднення.
ЕКЗ - ризик чи благо?
СУЗІ, ІКСІ, МЕЗА, ТЕЗИ, ПЕЗА
Хоча для багатьох пацієнтів з чоловічим фактором безпліддя ЕКЗ виявилося досить ефективно, було встановлено, що при зниженні кількості активно рухливих сперматозоїдів в еякуляті менше 4 млн, частота наступу вагітності після ЕКЗ різко знижується. Були зроблені спроби поліпшення частоти фертилізації у випадках вираженої астено- та/або олігозооспермії шляхом введення сперматозоїдів під зону пеллюциду (СУЗД-SUZI). Проте ефект був мінімальний. Ще в середині 90-х років Mettler була спроба введення сперматозоїдів прямо в ооцити і тоді ж вона повідомила про повну неефективність цієї мікроманіпуляції (ІКСІ, ICSI). Лише через 10 років R. Palermo та А. van Steirteghem повторили ці спроби і отримали частоту настання вагітності, порівнянну зі звичайним ЕКЗ. Тоді ж було зрозуміло причину драматичної невдачі Меttler, яка затримала розвиток ІКСІ на 10 років. Виявилося, що недостатньо гострий інструмент - голка, що несе сперматозоїд, - не проникає в ооплазму, а в силу еластичності мембрани, що покриває її, відсуває її і в результаті чоловічі статеві клітини виявляються просто під блискучою оболонкою, а не всередині ооциту. Було розроблено спеціальну техніку виготовлення інструментів та проведення ін'єкції (з контрольним всмоктуванням ооплазми) для того, щоб забезпечити дійсне проникнення сперматозоїда в ооцит. Після відпрацювання безлічі нюансів (знерухомлення сперматозоїдів, орієнтація ооциту щодо голки в момент ін'єкції тощо) виявилося, що навіть при найважчих формах чоловічої безплідності за наявності лише поодиноких сперматозоїдів у всьомуеякуляті, частота настання вагітності після ІКСІ навіть перевищує таку після звичайного ЕКЗ.
Більш того, з'ясувалося, що при обструктивній олігоастеноспермії проведення ІКСІ можливе з використанням клітин, отриманих шляхом біопсії яєчка (ТЕЗА) або його придатка (МЕЗА). В даний час відкритій біопсії віддають перевагу надшкірній тонкоголковій біопсії, що отримала назву ПЕЗА. Натхненні успішними результатами дослідники зробили спробу ІКСІ і при необструктивній формі астено/олігозооспермії шляхом введення в ооцит незрілих статевих клітин — круглих і поздовжніх сперматид. У літературі чимало повідомлень про успішний результат таких спроб. З моменту активного впровадження ІКСІ практично відпала необхідність у донорській спермі. Число чоловіків, у яких не можуть бути отримані статеві клітини для проведення ІКСІ і доводиться вдаватися до донорської сперми, не перевищує 2% від усього числа чоловіків, які страждають на безпліддя. Таким чином, ІКСІ дозволила мати генетично рідних дітей навіть чоловікам із вкрай важкими формами безпліддя. Однак останні знахідки говорять про високу частоту генетичної патології у таких чоловіків і високий ризик передачі цієї патології потомству. Тому питання про лікування чоловічої безплідності в цілому поки що не можна вважати закритим.
Преимплантационная діагностика спадкових захворювань Найбільш вражаючим досягненням ДРТ є преимплантационная генетична діагностика (ПГД). У цьому випадку метою ДРТ є не лікування безпліддя, а доступ до зародкових клітин. Існує два варіанти ПГД: з біопсією ембріона (A. Handysait, 1990) та з біопсією полярного тільця (Yu. Verlinsky, 1989). Число показань до ПГД неухильно зростає. Якщо кілька років тому це було п'ять захворювань (гемофілія А, муковісцидоз, міатрофія Дюшена,ідіотія Тей-Сакса і дефіцит a-антитрипсину), то сьогодні у світі вже виконано ПГД із 18 спадкових захворювань. Більше того, в Чиказькому інституті репродуктивної генетики групою Ю. Верлінського виконано унікальну процедуру з ПГД, яка мала відразу дві цілі: відбір ембріона, з одного боку вільного від гена анемії Фанконі, а з іншого — ідентичного за генами гістосумісності з сестрою ще ненародженої дитини для пересадки їй стовбурових клітин пуповинної крові. В даний час така операція виконана, народився здоровий хлопчик, і лікування дівчинки, яка страждає на анемію Фанконі і перебувала в стані передлейко, успішно завершено. Тієї ж групою проведено ПГД хвороби Альцгеймера в сім'ї, де клінічний прояв цієї хвороби починався у її членів вже з 35-40 років.
ПГД хромосомних порушень здійснюється у пар, які за віком відносяться до групи високого ризику народження дітей з анеуплоїдією - трисомією по 13, 18, 21 та ін хромосом. Тим самим ПГД може розглядатися як метод альтернативний і переважний пренатальної діагностиці, оскільки дефектний ембріон не переноситься в матку матері, що виключає необхідність у подальшому перериванні вагітності.
Клонування. Трансгенез. Генна терапія. Стовбурові клітини
Усі останні досягнення біотехнологій базуються на методі ЕКЗ, оскільки саме він надає доступ до статевих клітин та ембріонів.
В даний час реалізовані два варіанти клонування: перенесення ядер ембріональних та соматичних клітин в енуклейовані ооцити. Клітка, що вийшла шляхом електрозлиття, отримала назву реконструйований ооцит. Показано, що потенція до розвитку ооциту, що утворився від донора — ембріональної клітини, у 20 разів вищий, ніж соматичний і що одночаснотреба перенести багато реконструйованих ембріонів, для того, щоб відбулася імплантація і подальший розвиток всього декількох з них. Також з'ясувалося, що чим молодша клітина, тим краще вона клонується, тобто потенція до клонування зменшується в міру старіння організму: краще клонуються ембріональні клітини, потім фетальні, клітини новонароджених і лише потім дорослої людини. Цікаво, що клонувати ссавців, причому великих, виявилося значно простіше, ніж, наприклад, жаб чи комах, що з меншою тривалістю ембріонального періоду останніх.
Трансгенез має на увазі перенесення ДНК однієї тварини в дорослий організм іншої, в результаті виходять тварини з новими властивостями. Вже сьогодні отримані свійські тварини-біореактори, молоко яких містить медичні препарати. Одержання цих препаратів з молока трансгенних тварин набагато простіше та дешевше, ніж використання синтетичних, бактеріальних чи культуральних біореакторів. Проте ефективність трансгенезу сьогодні ще дуже низька — менш як 1% тварин вдається зробити трансгенними. Тому наступне клонування таких тварин може вважатися виходом зі становища.
Ембріональні стовбурові клітини (ЕСК) – ще один аспект клонування. Плюрипотентність ембріональних клітин, тобто. їхня здатність розвиватися в будь-які клітини організму і замінювати будь-які пошкоджені диференційовані клітини, зробила ідею їх застосування в терапевтичних цілях безцінною. Однак отримати достатню кількість ЕСК можна лише шляхом клонування.
Практичний інтерес представляє клонування саме соматичної, тобто. диференційованої клітини з відомими властивостями. В даний час отримані клони із соматичних клітин вівці, телят, свиней, мишей та ін.Клонувати людину поки що не вдалося. Потрібно сподіватися, що це не за горами. Таким чином, ДРТ стали не тільки методом лікування безпліддя, а й постачальником матеріалу для реалізації воістину фантастичних біотехнологій, таких як клонування, трансгенез або терапія ЕСК.
Історія ДРТ в Україні
Перші лабораторії, які спочатку займалися суто науковими розробками в галузі ембріології, а потім приступили до практичної реалізації програми ЕКЗ, з'явилися ще в СРСР. Це була лабораторія Нікітіна, яка працювала над темою з 1969 р., та лабораторія Б.В. Леонова, що працювала з 1972 р. До середини 80-х років сформувалися 4 групи, які прагнули першими в СРСР отримати "дитину з пробірки". Група Нікітін-Китаїв-Савицький - Іванова (Ленінград); група Леонов-Лукін-Калініна (Москва); група Здановський-Аншина-Кечіян-Соломатина (Москва) і група Грищенко-Дахно-Піняєв (Харків). Дещо пізніше з'явилася група Карнаух-Пекарєв (Самара). Ці групи і стали "ядрами" вітчизняної репродуктології. Від них згодом відбрунькувалися інші групи, у них навчалися багато початківців своєї справи центрів.
Сьогодні вже неможливо собі уявити умови, в яких йшло становлення в СРСР цього методу лікування безпліддя, тоді як у світі вже сотнями народжувалися діти. Повна відсутність вітчизняного обладнання, інструментів, реактивів, медикаментів; немислимо бюрократизована процедура "безкоштовного" їх отримання ціною незліченних погоджень, тверджень, догоджень, які забирали роки життя та роботи. Абсолютна неможливість контактів із зарубіжними лабораторіями, які успішно практикували в даній галузі. Практично повна недоступність спеціальної англомовної літератури за повної відсутності українськомовної. Кожна група починала з повного нуля. наотримання першої дитини in vivo у групі Нікітіна пішло 17 років, Леонова - 14 років, Здановського - 6 років. Ось "як це було".
Б.В. Леонов: Почалося все із боротьби. МОЗ СРСР не могло дати грошей на створення лабораторії, з іншого боку — громадськість, у тому числі й медична, була проти витрачання грошей на лікування безпліддя замість лікування тяжкохворих, у тому числі серцевих. Тому лунали такі заяви, як: це діти "діамантові", "платинові" тощо, казали, що це нерозумне витрачання державних коштів, що програма аморальна. Останній мотив був незрозумілий. Але ми продовжували боротися.
М.Б. Аншина: Ми не знали навіть як виглядають ооцити. Потім, навчившись дізнаватися про них, значною мірою завдяки " екскурсії " в лабораторію А.І. Нікітіна, зрозуміли, що дуже багато клітин раніше просто викидали, будучи при цьому розчаровані їх черговим неотриманням. А оцінка зрілості. … Адже ніде було прочитати, не лише подивитися. Роки пішли на розуміння того, що нікчемні нюанси можуть відігравати фатальну роль у результаті всієї процедури. Два роки ми билися над тим, що не йде дроблення, допоки не замінили радянські, як виявилося, токсичні піпетки на імпортні — одразу пішло дроблення. Ще стільки ж не наставала вагітність, поки австрійський колега, який випадково заглянув до лабораторії, не показав, як треба робити перенесення ембріонів. Тут же пішли вагітності. Сьогодні може викликати лише веселощі спогади про те, як шеф — В.М. Здановський - набивав свою машину пацієнтками і віз їх на УЗД в інший кінець Москви, в МОНІАГ. Але в той час єдиний доступний нам апарат знаходився саме там: перехожі шарахалися осторонь групи жінок у однакових лікарняних халатах, склянку за склянкою поглинали воду з автомата з газованою водою. Нікомуна думку не спадало, що йде наповнення сечового міхура, припускали зовсім інше. Зате гормональний моніторинг з забаганки радянського розподілу благ був доступний і вдосконалений настільки, що кілька разів, пішовши на лапароско пію з метою отримання яйцеклітин, ми бачили процес овуляції в всій його красі.
В.М. Здановський: Я впевнений, що в нас перша дитина була б на два-три роки раніше, якби чоловіки здавали сперму не в громадському туалеті, а ми б навчилися розпізнавати пов'язану з цим причину інфікування культурального середовища. . Слід із сумом визнати, що навіть після переможних фанфар, які пролунали в кожній із груп з приводу народження першої дитини з пробірки, ще протягом багатьох років вагітності in vivo у нашій країні були поодинокими. На зміну радянському часу прийшли часи тотального розвалу та повного припинення державного фінансування програм з лікування безпліддя. В умовах, коли лікування безпліддя не входило до списку обов'язкових медичних послуг населенню, ентузіазм та особиста ініціатива фахівців значною мірою визначали розвиток цього виду медичної допомоги у нашій країні.